2 ، Pfu PCR مکس

د الټرا خالص لوړ مخلص توق DNA پولیمریز.

د Pfu DNA پولیمریز د E.coli څخه د کلون شوي پیروکوکس Furiosis DNA پولیمریز جین سره څرګند شوی او د څو کالم پاکولو سره پاک او جلا شوی. ځکه چې Pfu 3′-5 ′ exonuclease فعالیت لري ، دا د DNA پراخولو پروسې کې پروف ریډ کولی شي ، پداسې حال کې چې دودیز تق DNA پولیمریز نشي کولی. که څه هم نور د تاک DNA پولیمیرس لکه وینټ ، ډیپ وینټ ، ټلي ، UITma ، او نور د پروف ریډینګ دندې لري ، Pfu تر دې دمه د موندل شوي ټولو تاک DNA پولیمیرسونو کې ترټولو ټیټ ناسم شرح لري. د Pfu DNA پولیمریز د عام تاق DNA پولیمریز په پرتله غوره تودوخې ثبات لري ، او دا کولی شي د 90 than څخه ډیر فعالیت په 95 ° C کې د یو ساعت لپاره وساتي.

یو ټیوب Pfu PCR مکس (د ملي عالي ټیک محصول تصدیق)

■ د Pfu PCR مکس د PCR عکس العمل ځانګړتیا او حساسیت ښه کړی او کولی شي پیچلي ټیمپلیټونه لوړ GC مینځپانګې ، ثانوي جوړښت او ورته سره پراخه کړي. لکه څنګه چې د هدف ټیمپلیټ 2 کاپي خورا ټیټ کیدی شي ، د ډیرې درست تجربوي پایلو تضمین کول.

P د Pfu ماسټر مکس ځانګړی فورمول د عکس العمل ټول سیسټم خورا مستحکم کوي ، او فعالیت به په 4 ° C کې د بار بار کنګل کیدو یا اوږدمهاله ذخیره کولو سره اغیزمن نشي.

PC د PCR مستحکم او مؤثره مخکې چمتو شوي مخلوط حل کولی شي عملیات ګړندي او ساده کړي ، د کار شدت او د نمونې اخیستنې غلطي خورا راکموي. د لوړ فعالیت PCR لوړونکی او اصلاح کونکی هم په مکس کې شامل دي ، کوم چې د PCR شرایطو اړتیاوې کموي.

دا محصول دواړه د رنګ لرونکي او له رنګ څخه پاک سیسټمونه لري. د رنګ لرونکي PCR مکس محصولات د PCR وروسته مستقیم الیکټروفورس کیدی شي ، پرته لدې چې د نمونې بفر اضافه کړي.

بلی. نه	د بسته کولو اندازه
4992780	1ml
4992781	5*1ml
4992782	1ml
4992906	5*1ml

موږ ته بریښنالیک واستوئ

د محصول تفصیل

کاري فلو

پرله پسې پوښتنې

د محصول ټګونه

د فعالیت تعریف

د 1 واحد (U) Pfu DNA پولیمریز فعالیت د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی چې اړتیا یې د 10 nmol deoxynucleotides اسید نه حل کېدونکي موادو کې په 74 ° C کې د 30 دقیقو دننه د فعال سالمون سپرم DNA په کارولو سره د یوې نمونې/پریمر په توګه کارول کیږي.

د کیفیت کنټرول

د SDS-PAGE کشف لخوا پاکوالی له 99 than څخه ډیر دی د خارجي نیوکلیز هیڅ فعالیت ندی موندل شوی په انساني جینوم کې د واحد کاپي جین په مؤثره توګه پراخه کیدی شي هیڅ د پام وړ فعالیت نه بدلیږي کله چې د یوې اونۍ لپاره د خونې تودوخې کې زیرمه شي.

اصلي تخنیکي پیرامیټرې

دا 3′-5 ′ exonuclease فعالیت لري او 5′-3 ′ exonuclease فعالیت نلري. د DNA پراخولو سرعت د تق پولیمریز په پرتله ټیټ دی ، او عموما د Pfu انزیم توسیع سرعت په یوه دقیقه کې 0.5-1 kb دی. د Pfu حرارتي ثبات د تق څخه غوره دی. د لوړ GC مینځپانګو سره د نمونو لپاره ، د تودوخې درجه 98 ° C ته لوړه کیدی شي ، کوم چې د Pfu پولیمریز فعالیت باندې هیڅ اغیزه نلري. د PCR محصول په بشپړ ډول پای ته رسیدونکی دی ، کوم چې د TA ویکټر سره تړل کیدو دمخه یا د بلنټ پای شوي ویکتور سره کلون کولو دمخه د 3'-dA اوورینګ سره اضافه کیدی شي.

غوښتنلیکونه

دا د DNA لوړ وفادارۍ لوړولو لپاره کارول کیدی شي ، لکه د جین څرګندونې کلونینګ ، د سایټ لخوا لارښود شوي تغیر ، د واحد نیوکلیوټایډ پولیمورفیزم (SNP) تحلیل او پای ترمیم.

ټول محصولات د ODM/OEM لپاره تنظیم کیدی شي. د جزیاتو لپاره ،مهرباني وکړئ کلیک شوی خدمت (ODM/OEM) کلیک وکړئ

مخکینی: د ګړندي سایټ لخوا لارښود شوي میوټګینیسیس کټ

بل: د الټرا های فیدیلټي PCR کټ

د 1kb ټوټې پراخولو لپاره د نمونې په توګه جینومیک DNA وکاروئ.
د PCR عکس العمل وروسته ، د الیکټروفورسیس کشف لپاره 5 μl واخلئ.

پوښتنه: د پراخولو بندونه نشته

A-1 کينډۍ

■ نمونه د پروټین ناپاکۍ یا د تقطیر مخنیوي ، او نور لري. DNA د DNA نمونه پاک کړئ ، د پروټین ناپاکۍ لرې کړئ یا د پاکولو کټونو سره د DNA نمونه راوباسئ.

template د سانچې ډیناتوریشن بشپړ ندی —— په مناسب ډول د ډیناتوریشن تودوخه لوړه کړئ او د ډیینټریشن وخت اوږد کړئ.

■ د کينډۍ تخريب the کينډۍ بيا چمتو کړئ.

A-2 پریمر

د پریمر ضعیف کیفیت-د پریمر بیا ترکیب.

■ د پریمر تخریب —— د لوړ غلظت لرونکي پریمر د ساتنې لپاره کوچني حجم ته جلا کړئ. د ډیری یخیدو او ژړیدو یا اوږدمهاله 4 ° C کریوپریزر څخه مخنیوی وکړئ.

pri د پریمرونو ناسم ډیزاین (د مثال په توګه د پریمر اوږدوالی کافي ندي ، د پریمرونو ترمینځ رامینځته شوی ډیمر ، او نور) -د ډیزاین پریمرونه (د پریمر ډیمر او ثانوي جوړښت رامینځته کیدو څخه مخنیوی وکړئ)

A-3 Mg²⁺تمرکز

■ Mg²⁺ تمرکز خورا ټیټ دی - په مناسب ډول Mg ته وده ورکول²⁺تمرکز: Mg غوره کړئ²⁺ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز²⁺ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.

A-4 دحرارت درجه

an د لوړ انیلینګ تودوخه د پریمر او ټیمپلیټ پابندۍ اغیزه کوي. د انیلینګ تودوخې کم کړئ او د 2 ° C درجې سره حالت مطلوب کړئ.

A-5 د تمدید وخت

extension د تمدید لنډ وخت extension د تمدید وخت زیات کړئ.

پوښتنه: غلط مثبت

فینومینا: منفي نمونې د هدف ترتیب بډونه هم ښیې.

د PCR A-1 ککړتیا

target د هدف ترتیب یا پراخولو محصولاتو کراس ککړتیا are په احتیاط سره په منفي نمونه کې د هدف ترتیب لرونکي نمونه پایپټ نه کړئ یا د سنټرفیج ټیوب څخه یې وغورځوئ. ریجنټونه یا تجهیزات باید د موجود نیوکلیک اسیدونو له مینځه وړو لپاره اتوماتیک شي ، او د ککړتیا شتون باید د منفي کنټرول تجربو له لارې وټاکل شي.

■ د ریجینټ ککړتیا the د ریجینټونو جلا کول او په ټیټ تودوخې کې ذخیره کول.

A-2 اعظمr

■ Mg²⁺ تمرکز خورا ټیټ دی - په مناسب ډول Mg ته وده ورکول²⁺ تمرکز: Mg غوره کړئ²⁺ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز²⁺ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.

■ د پریمر نامناسب ډیزاین ، او د هدف ترتیب د غیر هدف شوي ترتیب سره هومولوژي لري. د بیا ډیزاین پریمرونه.

پوښتنه: غیر مشخص توسعه

فینومینا: د PCR امپلیفیکیشن بینډونه د متوقع اندازې سره متناقض دي ، یا لوی یا کوچني ، یا ځینې وختونه دواړه ځانګړي امپلیفیکیشن بینډونه او غیر ځانګړي امپلیفیکیشن بینډونه واقع کیږي.

A-1 پریمر

pri د پریمر ضعیف مشخصات

د بیا ډیزاین پریمر.

■ د پریمر غلظت خورا لوړ دی ro په مناسب ډول د ډیناتوریشن تودوخه ډیروي او د ډیینټریشن وخت اوږدوي.

A-2 Mg²⁺ تمرکز

Mg د Mg²⁺ تمرکز خورا لوړ دی - په مناسب ډول د Mg2+ غلظت کم کړئ: Mg غوره کړئ²⁺ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز²⁺ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.

A-3 د تودوخې وړ پولیمریز

en د انزایم ډیر مقدار - د انزیم مقدار په مناسب ډول د 0.5 U په وقفو کې کم کړئ.

A-4 دحرارت درجه

■ د انیلینګ تودوخه خورا ټیټه ده —— په مناسب ډول د انیلینګ تودوخه لوړه کړئ یا د دوه مرحلو انیلینګ میتود غوره کړئ

د A-5 PCR دورې

د PCR ډیری دورې - د PCR دورو شمیر کم کړئ.

پوښتنه: پیچ یا سمیر بډونه

A-1 پریمرoor ضعیف مشخصیت-د پریمر بیا ډیزاین کول ، د پریمر موقعیت او اوږدوالی بدل کړئ ترڅو د دې مشخصیت لوړ کړي یا ځړول شوی PCR ترسره کړئ.

A-2 کينډۍ DNA

- دا سانچه خالص نده - سانچه پاک کړئ یا د پاکولو کټونو سره DNA راوباسئ.

A-3 Mg²⁺ تمرکز

—— ایم جی²⁺ تمرکز خورا لوړ دی - په مناسب ډول Mg کم کړئ²⁺ تمرکز: Mg غوره کړئ²⁺ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز²⁺ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.

A-4 dNTP

د DNTPs غلظت خورا لوړ دی - د DNTP غلظت په مناسب ډول کم کړئ

A-5 دحرارت درجه

ooد ټیټ انیلینګ تودوخه —— په مناسب ډول د انیلینګ تودوخه لوړه کړئ

A-6 دورې

- ډیری دورې - د دورې شمیره غوره کړئ

پوښتنه: د 50 PCl PCR غبرګون سیسټم کې څومره نمونه DNA باید اضافه شي؟

پوښتنه: اوږده ټوټې څنګه پراخه کړو؟

لومړی ګام د مناسب پولیمریز غوره کول دي. منظم د تاک پولیمریز د 3'-5 'ایکسونوکلیز فعالیت نشتوالي له امله ثبوت نشي لوستلی ، او ناسم میتود به د ټوټو غزولو موثریت خورا راکم کړي. له همدې امله ، د تق تق پولیمریز نشي کولی په مؤثره توګه د 5 kb څخه لوی هدف ټوټې پراخه کړي. د ځانګړي ترمیم یا نورو لوړ وفادارۍ پولیمریز سره د تق پولیمریز باید د توسعې موثریت ښه کولو او د اوږدې ټوټې امپلیفیکیشن اړتیاو پوره کولو لپاره وټاکل شي. سربیره پردې ، د اوږدو ټوټو پراخول هم د پریمر ډیزاین ورته تنظیم کولو ته اړتیا لري ، د توزیع وخت ، د توسیع وخت ، د بفر pH ، او نور معمولا ، د 18-24 bp سره پریمر کولی شي غوره حاصل لامل شي. د ټیمپلیټ زیانونو مخنیوي لپاره ، په 94 ° C کې د تخفیف وخت باید په یوه دوره کې 30 ثانیو یا لږ ته راکم شي ، او د تودوخې درجه 94 ° C ته لوړیدو دمخه باید د 1 دقیقې څخه کم وي. سربیره پردې ، د تودوخې تودوخې شاوخوا 68 ° C کې تنظیم کول او د 1 kb/min نرخ سره د توسعې وخت ډیزاین کول کولی شي د اوږدو ټوټو مؤثره وده یقیني کړي.

پوښتنه: څنګه د PCR پراخولو وفادارۍ ته وده ورکړو؟

د PCR پراخېدو د غلطۍ کچه د لوړ وفادارۍ سره د مختلف DNA پولیمیراسونو په کارولو سره کم کیدی شي. تر دې دمه د موندل شوي ټولو تاک DNA پولیمیرسونو کې ، Pfu انزیم د خطا ټیټه کچه او ترټولو لوړ وفاداري لري (ضمیمه شوی جدول وګورئ). د انزیم انتخاب سربیره ، څیړونکي کولی شي د عکس العمل شرایطو مطلوب کولو سره د PCR تغیر کچه نوره هم راکمه کړي ، پشمول د بفر ترکیب مطلوب کول ، د ترموستایبل پولیمریز غلظت او د PCR دورې شمیره مطلوب کول.

خپل پیغام دلته ولیکئ او موږ ته یې واستوئ