د وینې مستقیم PCR کټ
برخی
■ ساده او ګړندی: د PCR پراخول په مستقیم ډول د وینې په کارولو سره د نمونې په توګه ترسره کیدی شي ، پرته لدې چې د نمونې چمتو کولو او DNA استخراج ستړي مرحلو ته اړتیا ولري.
p لوړ پاکوالی: د درملنې دمخه نمونې پریښودل او د DNA استخراج مرحلې کولی شي د نمونو کراس ککړتیا څخه مخنیوي کې مرسته وکړي.
through لوړ جریان: د لوی کچې نمونو لپاره د PCR پیژندنه د 96/384 څاه PCR پلیټونو سره د کټ په ترکیب سره ترسره کیدی شي.
■ قوي نړیوالتوب: دا کټ کولی شي د پیچلي ثانوي جوړښت سره لوړ GC ټوټې یا ټوټې په مؤثره توګه پراخه کړي ، او د تکثیر اوږدوالی تر 5 kb پورې کیدی شي.
stress د فشار قوي مقاومت: دا کټ د مختلف ډولونو او د وینې نمونو لپاره په بیلابیلو لارو کې ساتل کیدی شي.
غوښتنلیکونه
د دې کټ د PCR محصولات په 3′ پای کې "A" لري ، کوم چې په مستقیم ډول د TA ویکٹر کلونینګ لپاره کارول کیدی شي. دا کټ د جینومیک DNA ټوټو پراخولو ، د لوړ جریان جینیکیک تحلیل او جین ټایپینګ (لکه د جین کشف) تحلیل لپاره کارول کیدی شي.
ټول محصولات د ODM/OEM لپاره تنظیم کیدی شي. د جزیاتو لپاره ،مهرباني وکړئ کلیک شوی خدمت (ODM/OEM) کلیک وکړئ
 |
د یوې نمونې په توګه د انسان EDTA انټي کوګولیشن کارول ، د مختلف GC مینځپانګو سره 4 جینونه د وینې مستقیم PCR کټ لخوا پراخه شوي. د PCR غبرګون سیسټم 20 μl و ، او 1 μl وینه د نمونې په توګه کارول کیده. M: تیانجین مارکر II 1: د ټوټې اندازه 1090 bp ، د GC مینځپانګه 68.1؛ 2: د ټوټې اندازه 1915 bp ، د GC مینځپانګه 70.4؛ 3: د ټوټې اندازه 448 bp ، د GC مینځپانګه 74.8؛ 4: د ټوټې اندازه 1527 bp ، د GC مینځپانګه 61.5. تجربوي پایلې: د وینې مستقیم PCR کټ کولی شي د GC مینځپانګې سره د 61.5--74.8 range حد کې د DNA ټوټې په مؤثره توګه پراخه کړي ، وړاندیز کوي چې دا د لوړ GC ټوټو پراخولو وړتیا لري. |
 |
د انسان EDTA انټي کوګولیشن د نمونې په توګه کارول ، 5 مختلف جینونه (ActB ، Prp ، DN1.0 ، Hn2.0 او Hn4.0) د وینې مستقیم PCR کټ لخوا پراخه شوي. د PCR غبرګون سیسټم 20 μl و ، او 1 μl وینه د نمونې په توګه کارول کیده. M: تیانجین مارکر II 1-3: 3 د وینې مختلف نمونې NTC: له پریمر پرته کنټرول. تجربوي پایلې: د وینې مستقیم PCR کټ کولی شي تر 4 kb پورې اوږدوالي سره ټوټې پراخه کړي ، وړاندیز کوي چې دا د اوږدې ټوټو پراخولو وړتیا لري. |
 |
د بیلګې په توګه د انسان EDTA انټي کوګولیشن کارول ، د وینې مستقیم PCR کټ د وینې مختلف نمونو PCR کشف لپاره کارول شوی. د PCR غبرګون سیسټم 20 μl و ، او 1 μl وینه د نمونې په توګه کارول کیده. M: تیانجین مارکر II 1-9: د وینې د بارولو اندازه په ترتیب سره 0.1 μl ، 0.2 μl ، 0.3 μl ، 0.4 μl ، 1 μl ، 2 μl ، 3 μl ، 4 μl او 5 μl ده؛ NTC: له کومې نمونې پرته کنټرول تجربوي پایلې: د وینې مستقیم PCR کټ د وینې په وړاندې قوي مقاومت لري او کولی شي د 0.1-5 μl بارولو حد سره د وینې نمونې پراخه کړي. |
 |
د انسان ، موږک ، چرګ او نورو ډولونو څخه د مختلف درملنې سره د وینې نمونې د نمونې په توګه کارول شوي. د وینې مستقیم PCR کټ د PRNP (انسان ، 750 bp) ، ایکټین (موږک ، 200 bp) ، او β-ایکټین (چرګ ، 1.0 kb) لوړولو لپاره کارول شوی و. د PCR غبرګون سیسټم 20 μl و ، او 1 μl وینه د نمونې په توګه کارول کیده. M: د تیانګین مارکر II. تجربوي پایلې: د وینې مستقیم PCR کټ په پراخه کچه نمونو کې پلي کیدی شي ، او د PCR مستقیم کشف د مختلف درملنې سره د مختلف ډولونو څخه د وینې نمونو کې ترسره کیدی شي. |
A-1 کينډۍ
■ نمونه د پروټین ناپاکۍ یا د تقطیر مخنیوي ، او نور لري. DNA د DNA نمونه پاک کړئ ، د پروټین ناپاکۍ لرې کړئ یا د پاکولو کټونو سره د DNA نمونه راوباسئ.
template د سانچې ډیناتوریشن بشپړ ندی —— په مناسب ډول د ډیناتوریشن تودوخه لوړه کړئ او د ډیینټریشن وخت اوږد کړئ.
■ د کينډۍ تخريب the کينډۍ بيا چمتو کړئ.
A-2 پریمر
د پریمر ضعیف کیفیت-د پریمر بیا ترکیب.
■ د پریمر تخریب —— د لوړ غلظت لرونکي پریمر د ساتنې لپاره کوچني حجم ته جلا کړئ. د ډیری یخیدو او ژړیدو یا اوږدمهاله 4 ° C کریوپریزر څخه مخنیوی وکړئ.
pri د پریمرونو ناسم ډیزاین (د مثال په توګه د پریمر اوږدوالی کافي ندي ، د پریمرونو ترمینځ رامینځته شوی ډیمر ، او نور) -د ډیزاین پریمرونه (د پریمر ډیمر او ثانوي جوړښت رامینځته کیدو څخه مخنیوی وکړئ)
A-3 Mg2+تمرکز
■ Mg2+ تمرکز خورا ټیټ دی - په مناسب ډول Mg ته وده ورکول2+ تمرکز: Mg غوره کړئ2+ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز2+ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.
A-4 دحرارت درجه
an د لوړ انیلینګ تودوخه د پریمر او ټیمپلیټ پابندۍ اغیزه کوي. د انیلینګ تودوخې کم کړئ او د 2 ° C درجې سره حالت مطلوب کړئ.
A-5 د تمدید وخت
extension د تمدید لنډ وخت extension د تمدید وخت زیات کړئ.
فینومینا: منفي نمونې د هدف ترتیب بډونه هم ښیې.
د PCR A-1 ککړتیا
target د هدف ترتیب یا پراخولو محصولاتو کراس ککړتیا are په احتیاط سره په منفي نمونه کې د هدف ترتیب لرونکي نمونه پایپټ نه کړئ یا د سنټرفیج ټیوب څخه یې وغورځوئ. ریجنټونه یا تجهیزات باید د موجود نیوکلیک اسیدونو له مینځه وړو لپاره اتوماتیک شي ، او د ککړتیا شتون باید د منفي کنټرول تجربو له لارې وټاکل شي.
■ د ریجینټ ککړتیا the د ریجینټونو جلا کول او په ټیټ تودوخې کې ذخیره کول.
A-2 اعظمr
■ Mg2+ تمرکز خورا ټیټ دی - په مناسب ډول Mg ته وده ورکول2+ تمرکز: Mg غوره کړئ2+ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز2+ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.
■ د پریمر نامناسب ډیزاین ، او د هدف ترتیب د غیر هدف شوي ترتیب سره هومولوژي لري. د بیا ډیزاین پریمرونه.
فینومینا: د PCR امپلیفیکیشن بینډونه د متوقع اندازې سره متناقض دي ، یا لوی یا کوچني ، یا ځینې وختونه دواړه ځانګړي امپلیفیکیشن بینډونه او غیر ځانګړي امپلیفیکیشن بینډونه واقع کیږي.
A-1 پریمر
pri د پریمر ضعیف مشخصات
د بیا ډیزاین پریمر.
■ د پریمر غلظت خورا لوړ دی ro په مناسب ډول د ډیناتوریشن تودوخه ډیروي او د ډیینټریشن وخت اوږدوي.
A-2 Mg2+ تمرکز
Mg د Mg2+ تمرکز خورا لوړ دی - په مناسب ډول د Mg2+ غلظت کم کړئ: Mg غوره کړئ2+ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز2+ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.
A-3 د تودوخې وړ پولیمریز
en د انزایم ډیر مقدار - د انزیم مقدار په مناسب ډول د 0.5 U په وقفو کې کم کړئ.
A-4 دحرارت درجه
■ د انیلینګ تودوخه خورا ټیټه ده —— په مناسب ډول د انیلینګ تودوخه لوړه کړئ یا د دوه مرحلو انیلینګ میتود غوره کړئ
د A-5 PCR دورې
د PCR ډیری دورې - د PCR دورو شمیر کم کړئ.
A-1 پریمرoor ضعیف مشخصیت-د پریمر بیا ډیزاین کول ، د پریمر موقعیت او اوږدوالی بدل کړئ ترڅو د دې مشخصیت لوړ کړي یا ځړول شوی PCR ترسره کړئ.
A-2 کينډۍ DNA
- دا سانچه خالص نده - سانچه پاک کړئ یا د پاکولو کټونو سره DNA راوباسئ.
A-3 Mg2+ تمرکز
—— ایم جی2+ تمرکز خورا لوړ دی - په مناسب ډول Mg کم کړئ2+ تمرکز: Mg غوره کړئ2+ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز2+ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.
A-4 dNTP
د DNTPs غلظت خورا لوړ دی - د DNTP غلظت په مناسب ډول کم کړئ
A-5 دحرارت درجه
ooد ټیټ انیلینګ تودوخه —— په مناسب ډول د انیلینګ تودوخه لوړه کړئ
A-6 دورې
- ډیری دورې - د دورې شمیره غوره کړئ
لومړی ګام د مناسب پولیمریز غوره کول دي. منظم د تاک پولیمریز د 3'-5 'ایکسونوکلیز فعالیت نشتوالي له امله ثبوت نشي لوستلی ، او ناسم میتود به د ټوټو غزولو موثریت خورا راکم کړي. له همدې امله ، د تق تق پولیمریز نشي کولی په مؤثره توګه د 5 kb څخه لوی هدف ټوټې پراخه کړي. د ځانګړي ترمیم یا نورو لوړ وفادارۍ پولیمریز سره د تق پولیمریز باید د توسعې موثریت ښه کولو او د اوږدې ټوټې امپلیفیکیشن اړتیاو پوره کولو لپاره وټاکل شي. سربیره پردې ، د اوږدو ټوټو پراخول هم د پریمر ډیزاین ورته تنظیم کولو ته اړتیا لري ، د توزیع وخت ، د توسیع وخت ، د بفر pH ، او نور معمولا ، د 18-24 bp سره پریمر کولی شي غوره حاصل لامل شي. د ټیمپلیټ زیانونو مخنیوي لپاره ، په 94 ° C کې د تخفیف وخت باید په یوه دوره کې 30 ثانیو یا لږ ته راکم شي ، او د تودوخې درجه 94 ° C ته لوړیدو دمخه باید د 1 دقیقې څخه کم وي. سربیره پردې ، د تودوخې تودوخې شاوخوا 68 ° C کې تنظیم کول او د 1 kb/min نرخ سره د توسعې وخت ډیزاین کول کولی شي د اوږدو ټوټو مؤثره وده یقیني کړي.
د PCR پراخېدو د غلطۍ کچه د لوړ وفادارۍ سره د مختلف DNA پولیمیراسونو په کارولو سره کم کیدی شي. تر دې دمه د موندل شوي ټولو تاک DNA پولیمیرسونو کې ، Pfu انزیم د خطا ټیټه کچه او ترټولو لوړ وفاداري لري (ضمیمه شوی جدول وګورئ). د انزیم انتخاب سربیره ، څیړونکي کولی شي د عکس العمل شرایطو مطلوب کولو سره د PCR تغیر کچه نوره هم راکمه کړي ، پشمول د بفر ترکیب مطلوب کول ، د ترموستایبل پولیمریز غلظت او د PCR دورې شمیره مطلوب کول.
د محصولاتو کټګورۍ
ولې موږ غوره کوو
د دې له تاسیس راهیسې ، زموږ فابریکه د اصولو په مراعتولو سره د نړۍ لومړۍ درجې محصولاتو ته وده ورکوي
لومړی کیفیت. زموږ محصولاتو په صنعت کې عالي شهرت ترلاسه کړی او د نوي او زړو پیرودونکو ترمینځ ارزښت لرونکي اعتماد.
- تلیفون: +86 010-59822688
- ودانۍ 5 ، شمیره 86 ، شوانګینګ لویدیځ سړک ، د چینګپینګ ولسوالۍ ، بیجینګ.
- people@tiangen.com
