د TIANSeq DirectFast کتابتون کټ (ایلومینا)

د DNA کتابتون ساختماني ټیکنالوژۍ نوی نسل پرته د ټوټې کیدو دمخه درملنه.

د TIANSeq DirectFast کتابتون کټ (ایلومینا) د ایلومینا تسلسل پلیټ فارم لپاره د DNA کتابتون چمتو کولو کټ دی. کټ د یو ګام عکس العمل پروسه غوره کوي ، کوم چې د پاکولو ډیری مرحلو ته اړتیا نلري. د DNA ټوټه کیدل ، د پای ترمیم او د DA- ګنډل په یو ټیوب انزایمیک عکس العمل کې ترسره کیدی شي. د کټ لخوا چمتو شوي د PCR امپلیفیکیشن ریجینټ هم په ځانګړي ډول مطلوب دی ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې د امپلیفیشن لخوا ترلاسه شوي DNA تسلسل لوړ حاصل ، ښه وفاداري او هیڅ اساس تعصب نلري.

بلی. نه د بسته کولو اندازه
4992259 24 rxn
4992260 96 rxn

د محصول تفصیل

کاري فلو

تجرباتي بېلګه

پرله پسې پوښتنې

د محصول ټګونه

برخی

■ د ښه ترتیب کولو یووالي: د DNA ټوټې کولو پروسې او د PCR پراخولو پروسې هیڅ اساس تعصب نلري.
د لوړ کتابتون تبادلې موثریت: د لوړ موثریت کتابتون جوړول د 1 ng DNA نمونو لپاره تضمین کیدی شي.
■ ګړندی عملیات: د کتابتون جوړولو ټوله پروسه یوازې 2.5 ساعتونو ته اړتیا لري.
■ د لګښت وړ: هیڅ ځانګړي وسایل او تجهیزاتو ته اړتیا نشته

مشخصات

ډول: د ایلومینا لوړ تروپټ تسلسل پلیټ فارم لپاره د DNA کتابتون چمتو کول
نمونه: جینومیک DNA یا لوی ټوټه DNA
هدف: دوه ځله تړل شوی DNA
د نمونې ننوتل پیل کول: 1 ng- 1 μg
د عملیاتو وخت: 2.5 ساعته
ښکته غوښتنلیکونه: په ایلومینا پلیټ فارم کې ترتیب

ټول محصولات د ODM/OEM لپاره تنظیم کیدی شي. د جزیاتو لپاره ،مهرباني وکړئ کلیک شوی خدمت (ODM/OEM) کلیک وکړئ


  • مخکینی:
  • بل:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×

    Workflow Workflow

    د انعطاف وړ نمونې ننوتل او ټوټه شوې اندازهFlexible sample input and fragmented size شکل 1. د عکس العمل مختلف وختونو DNA ټوټې کولو پروفایلونه. 10 Ng او 1000 ng DNA د TIANSeq DirectFast DNA کتابتون کټ په کارولو سره ټوټه شوي. د عکس العمل محصولات چې د مختلف عکس العمل وخت سره درملنه کیږي د 1.8 × Ampure XP مقناطیسي موزو لخوا پاک شوي او د انجیلینټ 2100 لخوا تحلیل شوي.
    د کواریس په څیر د تسلسل پوښښCovaris-Like Sequencing Coverage شکل 2. د کتابتون چمتو کولو مختلف میتودونو جینوم پوښښ پرتله کول. د مختلف GC مینځپانګو سره درې باکتریایی جینومیک DNA مخلوط انډولر دي ، او د دې میتودونو په کارولو سره د مخلوط DNA کتابتونونو 100 ng د جینوم پوښښ پایله ترتیب کول پرتله شوي. پایلې ښیې چې د TIANSeq DirectFast کتابتون کټ د DNA ټوټه کیدو باندې ورته اغیز لري لکه میخانیکي شییر کول ، او د ټوټې کیدو لپاره هیڅ اساس تعصب شتون نلري.
    د 1 ng داخلي DNA په توګه د ټیټ لپاره هیڅ سیستماتیک تعصب نشتهNo Systematic Bias for As Low As 1 ng Input DNA شکل 3. د کتابتون چمتو کولو مختلف میتودونو جینوم پوښښ پرتله کول. د مختلف GC مینځپانګو سره درې باکتریایی جینومیک DNA مخلوط مساوي دي ، او د دې میتودونو په کارولو سره د 1 ng مخلوط DNA کتابتونونو د جینوم پوښښ پایله ترتیب کول پرتله شوي. پایلې ښیې چې د TIANSeq DirectFast کتابتون کټ د میخانیکي شیره کولو سره د قطع کیدو متوازنه اغیزه لري حتی د DNA ان پٹ لپاره تر 1 ng پورې ټیټ ، او هیڅ اساس تعصب شتون نلري.
    د PCR څخه پاک کاري فلو وړتیا

    Capable of PCR-Free Workflow

    شکل 4. د جینومیک DNA مختلف انټرنیټ د PCR یا PCR څخه پاک کتابتون جوړونې لخوا د کتابتون جوړولو لپاره کارول شوی ، او د جینوم پوښښ پایلې پرتله شوي. پایلې ښیې چې د یو ټیوب عملیاتو او مؤثره کتابتون ساختماني مرحلو سره ، د TIANSeq DirectFast کتابتون کټ سره جوړ شوی د DNA کتابتون د PCR بډایه کولو PCR څخه پاک کاري فلو دواړو لپاره د ټوټې تسلسل پوښښ توزیع کې میخانیکي شیر کولو سره لوړ ثبات ساتي.
     د کتابتون ساختماني وړتیا او حاصلاتو احصایهStatistics of Library Construction Efficiency and Yield شکل 5. د کتابتون DNA د کمیتي تحلیل پایلې د qPCR لخوا د کتابتون جوړولو وروسته د PCR څخه پاک میتود لخوا د مختلف پیل شوي مقدارونو (1 ، 10 ، 25 ، 50 ، 100 ، 500،1000 ng) سره ترلاسه شوي. د لاین ریګریشن تحلیل ښیې چې د کتابتون حاصل په پراخه نمونه ان پټ لړ کې ښه خطي اړیکې لري. د DNA ننوتلو لپاره تر 1 ng پورې ټیټ ، د کتابتون جوړونې موثریت نه کمیږي.

    د مختلف محصولاتو د ترتیب کولو معلوماتو پرتله کول

    Comparison of Sequencing Data of Different Products

    پوښتنه: د NGS کتابتون کې د ټوټو اندازو عمومي توزیع څه شی دی؟

    په اوسني وخت کې ، د لوړې کچې تسلسل ټیکنالوژي اساسا د راتلونکي نسل تسلسل ټیکنالوژۍ پراساس ده. لکه څنګه چې د راتلونکي نسل تسلسل ټیکنالوژۍ لوستلو اوږدوالی محدود دی ، موږ باید د بشپړ اوږدوالي تسلسل کوچني ټوټو کتابتونونو ته تسلسل ته مات کړو. د مختلف ترتیب کولو تجربو اړتیاو سره سم ، موږ معمولا د یو واحد پای ترتیب یا دوه ځله تسلسل غوره کوو. اوس مهال د راتلونکي نسل تسلسل کتابتون د DNA ټوټې عموما د 200-800 bp حد کې ویشل شوي.

    excel
    پوښتنه: د جوړ شوي کتابتون د DNA غلظت ټیټ دی.

    الف) DNA په کیفیت کې ضعیف دی او مخنیوی کونکي لري. د لوړ کیفیت DNA نمونې وکاروئ ترڅو د انزیم فعالیت مخنیوي څخه مخنیوی وکړئ.

    ب) د DNA نمونې اندازه ناکافي ده کله چې د DNA کتابتون جوړولو لپاره د PCR څخه پاک میتود وکاروئ. کله چې د ټوټه شوې DNA ننوتل له 50 ng څخه ډیر وي ، د PCR څخه پاک کاري جریان د کتابتون جوړولو پروسې په جریان کې په انتخابي ډول ترسره کیدی شي. که د کتابتون کاپي شمیره خورا ټیټه وي چې مستقیم ترتیب شي ، د DNA کتابتون د اډاپټر لیګیشن وروسته د PCR لخوا پراخه کیدی شي.

    c) د RNA ککړتیا د DNA ناسم لومړني مقدار ورکولو لامل کیږي د RNA ککړتیا ممکن د جینومیک DNA پاکولو پروسې کې شتون ولري ، کوم چې ممکن د کتابتون جوړولو پرمهال د DNA ناسم مقدار او ناکافي DNA بارولو لامل شي. RNA کولی شي د RNase سره درملنه کولو سره لرې کړي.

    پوښتنه: د DNA کتابتون د الیکټروفورسیس تحلیل کې غیر معمولي بندونه ښودلي.

    A-1

    a) کوچنۍ ټوټې (60 bp-120 bp) ښکاري کوچنۍ ټوټې معمولا د اډاپټر ټوټې یا ډیمرونه دي چې د اډاپټرونو لخوا رامینځته کیږي. د اجنکورټ AMPure XP مقناطیسي موزو سره پاکول کولی شي په مؤثره توګه د دې اډاپټر ټوټې لرې کړي او د تسلسل کیفیت ډاډمن کړي.

    ب) د PCR پراخیدو وروسته په کتابتون کې لویې ټوټې څرګندیږي د اډاپټر تړل کیدو وروسته به د کتابتون DNA ټوټې اندازه 120 bp زیاته شي. که د اډاپټر لیګیشن وروسته د DNA ټوټه له 120 bp څخه ډیر شي ، دا ممکن د ډیر PCR پراخیدو غیر معمولي ټوټې پراخېدو له امله رامینځته شي. د PCR دورو شمیر کمول د وضعیت مخه نیسي.

    c) د اډاپټر لیګیشن وروسته د کتابتون DNA ټوټو غیر معمولي اندازه پدې کټ کې د اډاپټر اوږدوالی 60 bp دی. کله چې د ټوټې دوه سرې اډاپټرونو ته وصل شي ، اوږدوالی به یې یوازې 120 bp زیات شي. کله چې د دې کټ لخوا چمتو شوي پرته بل اډاپټر وکاروئ ، مهرباني وکړئ له عرضه کونکي سره اړیکه ونیسئ ترڅو اړونده معلومات چمتو کړئ لکه د اډاپټر اوږدوالی. مهرباني وکړئ ډاډ ترلاسه کړئ چې د تجربې کاري جریان او عملیات په لارښود کې بیان شوي مرحلې تعقیبوي.

    d) د اډاپټر لیګیشن دمخه د DNA ټوټې غیر معمولي اندازه د دې ستونزې لامل ممکن د DNA ټوټې کیدو پرمهال د غلط عکس العمل شرایطو له امله وي. د مختلف DNA وختونو لپاره باید د عکس العمل مختلف وختونه وکارول شي. که د DNA ان پټ له 10 ng څخه ډیر وي ، موږ وړاندیز کوو د 12 دقیقې عکس العمل وخت د اصلاح لپاره د پیل وخت په توګه غوره کړو ، او پدې وخت کې تولید شوي ټوټې اندازه اساسا د 300-500 bp حد کې ده. کارونکي کولی شي د خپلو اړتیاو سره سم د 2-4 دقیقو لپاره د DNA ټوټو اوږدوالی کم یا کم کړي ترڅو د اړین اندازې سره د DNA ټوټې مطلوب کړي.

    A-2

    الف) د ټوټې کیدو وخت مطلوب ندی که ټوټه شوی DNA خورا کوچنی یا خورا لوی وي ، مهرباني وکړئ د عکس وخت وخت ټاکلو لپاره لارښوونې کې ورکړل شوي د ټوټې کولو وخت انتخاب لارښودونو ته مراجعه وکړئ ، او د دې وخت نقطه د کنټرول په توګه وکاروئ ، سربیره پردې یو تنظیم کړئ د غبرګون سیسټم د 3 دقیقو اوږدولو یا لنډولو لپاره ترڅو د ټوټې کیدو وخت کې دقیق سمون راولي.

    A-3

    د ټوټې ټوټې درملنې وروسته د DNA غیر معمولي اندازې توزیع

    الف) د ټوټې کیدو ریګینټ غلط تخم کولو میتود ، یا ریجینټ د ژړولو وروسته په بشپړ ډول نه مخلوط کیږي. په یخ باندې د 5 × فرګمنټیشن انزایم مکس ریګینټ پخه کړئ. یوځل چې خړوب شي ، ریبینټ په مساوي ډول د ټیوب لاندې ښکته کولو سره مخلوط کړئ. د ریجینټ څرخ مه کوئ!

    ب) د DNA داخلي نمونه EDTA یا نور ککړونکي لري د DNA پاکولو مرحله کې د مالګې آئنونو او چیلاټینګ اجنټونو له مینځه وړل په ځانګړي توګه د تجربې بریا لپاره مهم دي. که DNA په 1 × TE کې منحل شي ، د ټوټې کولو ترسره کولو لپاره لارښود کې چمتو شوي میتود وکاروئ. که په حل کې د EDTA غلظت ناڅرګند وي ، نو سپارښتنه کیږي چې DNA پاک کړي او د راتلونکي عکس العمل لپاره یې په ډایونیز شوي اوبو کې منحل کړي.

    c) د DNA لومړنی ناسم شمیرنه د ټوټه شوې DNA اندازه د DNA داخلي مقدار سره نږدې تړاو لري. د ټوټې کیدو درملنې دمخه ، د عکس سیسټم کې د DNA دقیق مقدار ټاکلو لپاره د Qubit ، Picogreen او نورو میتودونو په کارولو سره د DNA دقیق مقدار اړین دی.

     d) د عکس العمل سیسټم چمتو کول لارښوونې نه تعقیبوي د ټوټې شوي عکس العمل سیسټم چمتو کول باید د لارښوونو سره سم په یخ کې ترسره شي. د غوره اغیز ډاډ ترلاسه کولو لپاره ، د عکس العمل ټولې برخې باید په یخ کې کیښودل شي او د عکس العمل سیسټم چمتو کول باید د بشپړ یخیدو وروسته ترسره شي. د چمتووالي بشپړیدو وروسته ، مهرباني وکړئ فلیک یا پایپټ کړئ ترڅو په بشپړ ډول سره مخلوط شي. تاو مه کوئ!

    پوښتنه: د TIANSeq DirectFast DNA کتابتون کټ (ایلومینا) لپاره مهم یادداشتونه (4992259/4992260)

    1. د اختلاط ناسم میتود (بorه ، تاوتریخوالی ، او نور) به د کتابتون ټوټو غیر معمولي توزیع لامل شي (لکه څنګه چې لاندې عکس کې ښودل شوي) ، پدې توګه د کتابتون کیفیت اغیزه کوي. له همدې امله ، کله چې د فریمګینشن مکس عکس العمل حل چمتو کوئ ، مهرباني وکړئ د مخلوط کولو لپاره په نرمۍ سره پورته او ښکته پایپټ کړئ ، یا د ګوتو ټیپ وکاروئ او په مساوي ډول مخلوط کړئ. محتاط اوسئ چې د ورور سره ګډ نشي.

    excel

    2. د لوړ پاکوالي DNA باید د کتابتون جوړولو لپاره وکارول شي

    DNA د ښه DNA بشپړتیا: د الیکټروفورسیس بینډ له 30 kb څخه ډیر دی ، پرته له خولې

    ■ OD260/230:> 1.5

    ■ OD260/280: 1.7-1.9

    3. د DNA داخلي مقدار باید دقیق وي دا وړاندیز کیږي چې د DNA اندازه کولو لپاره د نوبت پرځای د Qubit او PicoGreen میتودونو څخه کار واخلي.

    4. د DNA حل کې د EDTA مینځپانګه باید مشخص شي EDTA د ټوټې کیدو عکس العمل باندې لوی نفوذ لري. که د EDTA مینځپانګه لوړه وي ، د DNA پاکوالي ته اړتیا ده د وروستي ازموینې دمخه ترسره شي.

    5. د ټوټې کیدو عکس العمل حل باید په یخ کې چمتو شي د ټوټې کیدو پروسه د عکس العمل تودوخې او وخت سره حساس وي (په ځانګړي توګه د اضافه کونکي اضافه کولو وروسته). د عکس العمل وخت دقت د ډاډ ترلاسه کولو لپاره ، مهرباني وکړئ په یخ کې د عکس العمل سیسټم چمتو کړئ.

    6. د ټوټې کیدو غبرګون وخت باید دقیق وي د ټوټې کولو مرحلې عکس العمل وخت به مستقیم د ټوټو محصولاتو اندازه اغیزه وکړي ، پدې توګه په کتابتون کې د DNA ټوټو اندازې ویش اغیزه کوي.

    پوښتنه: د TIANSeq فاسټ RNA کتابتون کټ (ایلومینا) لپاره مهم یادداشتونه (4992375/4992376)

    1. په دې کټ کې کوم ډول نمونه د تطبیق وړ ده؟

    د دې کټ پلي کیدونکي نمونې ډول کیدی شي د RNA ښه یا بشپړ RNA بشپړتیا سره پاک RNA وي. که ټول RNA د کتابتون جوړولو لپاره وکارول شي ، سپارښتنه کیږي چې لومړی د rRNA لرې کولو لپاره د rRNA تخفیف کټ (بلی#4992363/4992364/4992391) وکاروئ.

    2. ایا د FFPE نمونې د دې کټ سره د کتابتون جوړولو لپاره کارول کیدی شي؟

    د FFPE نمونو کې mRNA به تر یوې اندازې پورې تخریب شي ، د نسبي ضعیف بشپړتیا سره. کله چې د کتابتون جوړولو لپاره دا کټ وکاروئ ، دا سپارښتنه کیږي چې د ټوټې کیدو وخت مطلوب کړئ (د ټوټې کولو وخت لنډ کړئ یا د ټوټې کولو نه ترسره کول).

    3. د محصول لارښود کې چمتو شوي د اندازې انتخاب مرحلې څخه کار اخیستل ، څه شی ممکن د داخل شوې برخې د لږ انحراف لامل شي؟

    د اندازې انتخاب باید د دې محصول لارښود کې د اندازې انتخاب مرحلې سره په کلکه ترسره شي. که چیرې انحراف شتون ولري ، دلیل یې ممکن دا وي چې مقناطیسي مالګې د خونې تودوخې سره متوازن ندي یا په بشپړ ډول نه مخلوط شوي ، پایپټ درست ندی یا مایع په ټپ کې پاتې دی. سپارښتنه کیږي چې د تجربې لپاره د ټیټ جذب سره لارښوونې وکاروئ.

    د کتابتون په جوړولو کې د اډاپټرونو انتخاب

    د کتابتون ساختماني کټ کې اډاپټر ریجینټ شتون نلري ، او سپارښتنه کیږي چې دا کټ د TIANSeq Single-Index Adapter (Illumina) (4992641/4992642/4992378) سره په ګډه وکاروئ.

    5. د کتابتون QC

    د کتابتون کمیتي کشف: Qubit او qPCR په ترتیب سره د کتابتون ډله ایز غلظت او مولر غلظت ټاکلو لپاره کارول کیږي. عملیات په کلکه د محصول لارښود سره سم دي. د کتابتون غلظت به عموما د NGS تسلسل اړتیاوې پوره کړي. د کتابتون توزیع حد کشف کول: د کتابتون توزیع حد کشف کولو لپاره د Agilent 2100 Bioanalyzer کارول.

    6. د پراخیدو دورې شمیره انتخاب

    د لارښوونو مطابق ، د PCR دورو شمیره 6-12 ده ، او د اړتیا وړ PCR دورو شمیر باید د نمونې داخلې سره سم وټاکل شي. په لوړ حاصل لرونکي کتابتونونو کې ، ډیر لوړیدل معمولا په مختلف درجو کې پیښیږي ، کوم چې د Agilent 2100 Bioanalyzer په کشف کې د هدف حد څخه وروسته د یو څه لوی چوکۍ لخوا څرګندیږي ، یا د Qubit کشف شوي غلظت د qPCR په پرتله ټیټ دی. لږ پراخیدل یوه عادي پدیده ده ، کوم چې د کتابتون ترتیب او ورپسې ډیټا تحلیل اغیزه نه کوي.

    7. سپیکس د Agilent 2100 Bioanalyzer د کشف پروفایل کې څرګندیږي

    په اګیلینټ 2100 بایوانالیزر کشف کې د سپیکونو څرګندیدل د نمونو غیر مساوي ټوټې کیدو له امله دي ، چیرې چې په ځانګړي اندازه کې به ډیرې ټوټې وي ، او دا به د PCR بډای کیدو وروسته خورا څرګند شي. پدې حالت کې ، دا وړاندیز کیږي چې د اندازې انتخاب ترسره نکړئ ، د مثال په توګه د ټوټې کولو حالت 94 ° C ته د 15 دقیقو انکیوبیټ لپاره تنظیم کړئ ، چیرې چې د ټوټې ویش کوچنی او متمرکز دی ، او یووالي ښه کیدی شي.

    خپل پیغام دلته ولیکئ او موږ ته یې واستوئ