2 × طاق پلاتینم PCR مکس
د فعالیت تعریف
د 1 واحد (U) طاق پلاټینم DNA پولیمریز فعالیت د انزیم مقدار په توګه تعریف شوی چې د 10 nmol deoxynucleotides اسید نه حل کېدونکي مادې کې په 74 ° C کې د 30 دقیقو دننه د فعال سالمون سپرم DNA په کارولو سره د نمونې/پریمر په توګه تعریف شوی.
د کیفیت کنټرول
د SDS-PAGE کشف لخوا پاکوالی له 99 than څخه ډیر دی د خارجي نیوکلیز هیڅ فعالیت ندی موندل شوی په انساني جینوم کې د واحد کاپي جین په مؤثره توګه پراخه کیدی شي هیڅ د پام وړ فعالیت نه بدلیږي کله چې د یوې اونۍ لپاره د خونې تودوخې کې زیرمه شي.
اصلي تخنیکي پیرامیټرې
دا د 5′-3 ′ exonuclease فعالیت او 3′-5 ′ exonuclease فعالیت لري ، او د دې وفاداري د Pfu پولیمریز ترڅنګ ده. د تق پلاټینم پولیمریز غزولو سرعت د Pfu پولیمریز څخه ګړندی دی او د پراخولو موثریت یې لوړ دی. د PCR محصولات په مستقیم ډول د پای پای ته تړل کیدی شي یا د TA ویکتور سره کلون کیدی شي. که د کلونینګ موثریت ته اړتیا وي ، نو سپارښتنه کیږي چې لومړی پاک کړئ او په TA ویکټر کې کلون کولو دمخه 3'-dA اوور هینګ اضافه کړئ.
یو ټیوب طاق پلاټینم ماسټر مکس (د عالي عالي ټیک محصول تصدیق)
Ta د تق پلاټینم ماسټر مکس د PCR عکس العمل ځانګړتیا او حساسیت ښه کړی او کولی شي پیچلي ټیمپلیټونه د لوړ GC مینځپانګې ، ثانوي جوړښت او ورته سره پراخه کړي. لکه څنګه چې د هدف ټیمپلیټ 2 کاپي خورا ټیټ کیدی شي ، د ډیرې درست تجربوي پایلو تضمین کول.
Ta د طاق پلاټینم ماسټر مکس ځانګړی فورمول د عکس العمل ټول سیسټم خورا مستحکم کوي ، او فعالیت به په 4 ° C کې د بار بار کنګل کیدو یا اوږدمهاله ذخیره کولو سره اغیزمن نشي.
PC د PCR مستحکم او موثره مخکې چمتو شوی مخلوط حل کولی شي عملیات ګړندي او ساده کړي ، د کار شدت او د نمونې اخیستنې غلطي خورا راکموي. د لوړ فعالیت PCR لوړونکی او اصلاح کونکی هم په مکس کې شامل دي ، کوم چې د PCR شرایطو اړتیاوې کموي.
دا محصول دواړه د رنګ لرونکي او له رنګ څخه پاک سیسټمونه لري. د رنګ لرونکي ماسټر مکس محصولات د PCR وروسته مستقیم الیکټروفورس کیدی شي ، پرته لدې چې د بارولو بفر اضافه کړي.
غوښتنلیکونه
دا کولی شي د Pfu پولیمریز ځای ونیسي ترڅو د پیچلي ټیمپلیټونو لکه جینومونو څخه د لوړ وفادارۍ محصولاتو ته وده ورکړي ، او دا د غوښتنلیکونو لپاره مناسب دی لکه د بیان جینونو کلون کول ، د سایټ ځانګړي تغیرات او د واحد نیوکلیوټایډ پولیمورفیزم تحلیل (SNP) ، او داسې نور.
د PCR پریمرونو ډیزاین کولو کې احتیاطات:
د پریمر اوږدوالی معمولا 20-25 متره وي. په هرصورت ، کله چې د PCR اوږده ټوټه ترسره کوئ ، د پریمر اوږدوالی باید 30-35 Mer ته لوړ شي.
the د دوه پریمرونو ترمینځ هیڅ تکمیلی جوړه شتون نلري ، په ځانګړي توګه د 3 ′ پای کې د وروستي 3 اډو لپاره.
د GC مینځپانګه باید 50-60 be وي ، او د ځایی بډایه GC یا AT څخه مخنیوی وکړئ. د پریمر او ټیمپلیټ په ثابت ډول تړلو لپاره ، په 3 ′ پای کې د AT بډایه جوړښت څخه مخنیوی وکړئ.
secondary د ثانوي جوړښت رامینځته کولو لپاره د پریمر څخه مخنیوی وکړئ.
two دوه پریمر د Tm تودوخې سره یو بل ته نږدې وټاکئ.
د PCR لپاره د پریمر Tm ارزښت محاسبه کول:
■ کله چې پریمر له 20 mer څخه کم وي: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ کله چې پریمر له 20 mer څخه ډیر وي: Tm = 81.5+0.41 × (GC٪)-600/L ، چیرې چې L د پریمر اوږدوالی وي.
the د انیلینګ تودوخه په (Tm-5) ■ C کې تنظیم کړئ.
د PCR پریمر داخل
د پریمر مناسب وروستی غلظت د 0.1 μM او 1.0 μM ترمینځ ټاکل کیدی شي. خورا ټیټ د پریمر غلظت د امپلیفیکیشن محصولاتو ټیټ حاصل لامل کیږي ، پداسې حال کې چې خورا لوړ د پریمر غلظت غیر مشخص پراخیدو ته ډیر حساس دی. معمولا ، کله چې د ټیمپلیټ DNA مقدار لوی یا پیچلي ټیمپلیټ DNA وي (لکه د انسان جینوم DNA) د یوې نمونې په توګه کارول کیږي ، د پریمر غلظت باید ټیټ وي. کله چې د ټیمپلیټ DNA مقدار کوچنی وي یا ساده ټیمپلیټ DNA (د مثال په توګه پلازمیډ DNA ، او نور) د یوې نمونې په توګه کارول کیږي ، د پریمر غلظت باید لوړ وي.
ټول محصولات د ODM/OEM لپاره تنظیم کیدی شي. د جزیاتو لپاره ،مهرباني وکړئ کلیک شوی خدمت (ODM/OEM) کلیک وکړئ
  |
د 1 kb ټوټې پراخولو لپاره د جینومیک DNA د نمونې په توګه وکاروئ. د PCR عکس العمل وروسته ، د الیکروفورسیس کشف لپاره 5 μl واخلئ. |
A-1 کينډۍ
■ نمونه د پروټین ناپاکۍ یا د تقطیر مخنیوي ، او نور لري. DNA د DNA نمونه پاک کړئ ، د پروټین ناپاکۍ لرې کړئ یا د پاکولو کټونو سره د DNA نمونه راوباسئ.
template د سانچې ډیناتوریشن بشپړ ندی —— په مناسب ډول د ډیناتوریشن تودوخه لوړه کړئ او د ډیینټریشن وخت اوږد کړئ.
■ د کينډۍ تخريب the کينډۍ بيا چمتو کړئ.
A-2 پریمر
د پریمر ضعیف کیفیت-د پریمر بیا ترکیب.
■ د پریمر تخریب —— د لوړ غلظت لرونکي پریمر د ساتنې لپاره کوچني حجم ته جلا کړئ. د ډیری یخیدو او ژړیدو یا اوږدمهاله 4 ° C کریوپریزر څخه مخنیوی وکړئ.
pri د پریمرونو ناسم ډیزاین (د مثال په توګه د پریمر اوږدوالی کافي ندي ، د پریمرونو ترمینځ رامینځته شوی ډیمر ، او نور) -د ډیزاین پریمرونه (د پریمر ډیمر او ثانوي جوړښت رامینځته کیدو څخه مخنیوی وکړئ)
A-3 Mg2+تمرکز
■ Mg2+ تمرکز خورا ټیټ دی - په مناسب ډول Mg ته وده ورکول2+ تمرکز: Mg غوره کړئ2+ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز2+ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.
A-4 دحرارت درجه
an د لوړ انیلینګ تودوخه د پریمر او ټیمپلیټ پابندۍ اغیزه کوي. د انیلینګ تودوخې کم کړئ او د 2 ° C درجې سره حالت مطلوب کړئ.
A-5 د تمدید وخت
extension د تمدید لنډ وخت extension د تمدید وخت زیات کړئ.
فینومینا: منفي نمونې د هدف ترتیب بډونه هم ښیې.
د PCR A-1 ککړتیا
target د هدف ترتیب یا پراخولو محصولاتو کراس ککړتیا are په احتیاط سره په منفي نمونه کې د هدف ترتیب لرونکي نمونه پایپټ نه کړئ یا د سنټرفیج ټیوب څخه یې وغورځوئ. ریجنټونه یا تجهیزات باید د موجود نیوکلیک اسیدونو له مینځه وړو لپاره اتوماتیک شي ، او د ککړتیا شتون باید د منفي کنټرول تجربو له لارې وټاکل شي.
■ د ریجینټ ککړتیا the د ریجینټونو جلا کول او په ټیټ تودوخې کې ذخیره کول.
A-2 اعظمr
■ Mg2+ تمرکز خورا ټیټ دی - په مناسب ډول Mg ته وده ورکول2+ تمرکز: Mg غوره کړئ2+ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز2+ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.
■ د پریمر نامناسب ډیزاین ، او د هدف ترتیب د غیر هدف شوي ترتیب سره هومولوژي لري. د بیا ډیزاین پریمرونه.
فینومینا: د PCR امپلیفیکیشن بینډونه د متوقع اندازې سره متناقض دي ، یا لوی یا کوچني ، یا ځینې وختونه دواړه ځانګړي امپلیفیکیشن بینډونه او غیر ځانګړي امپلیفیکیشن بینډونه واقع کیږي.
A-1 پریمر
pri د پریمر ضعیف مشخصات
د بیا ډیزاین پریمر.
■ د پریمر غلظت خورا لوړ دی ro په مناسب ډول د ډیناتوریشن تودوخه ډیروي او د ډیینټریشن وخت اوږدوي.
A-2 Mg2+ تمرکز
Mg د Mg2+ تمرکز خورا لوړ دی - په مناسب ډول د Mg2+ غلظت کم کړئ: Mg غوره کړئ2+ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز2+ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.
A-3 د تودوخې وړ پولیمریز
en د انزایم ډیر مقدار - د انزیم مقدار په مناسب ډول د 0.5 U په وقفو کې کم کړئ.
A-4 دحرارت درجه
■ د انیلینګ تودوخه خورا ټیټه ده —— په مناسب ډول د انیلینګ تودوخه لوړه کړئ یا د دوه مرحلو انیلینګ میتود غوره کړئ
د A-5 PCR دورې
د PCR ډیری دورې - د PCR دورو شمیر کم کړئ.
A-1 پریمرoor ضعیف مشخصیت-د پریمر بیا ډیزاین کول ، د پریمر موقعیت او اوږدوالی بدل کړئ ترڅو د دې مشخصیت لوړ کړي یا ځړول شوی PCR ترسره کړئ.
A-2 کينډۍ DNA
- دا سانچه خالص نده - سانچه پاک کړئ یا د پاکولو کټونو سره DNA راوباسئ.
A-3 Mg2+ تمرکز
—— ایم جی2+ تمرکز خورا لوړ دی - په مناسب ډول Mg کم کړئ2+ تمرکز: Mg غوره کړئ2+ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز2+ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.
A-4 dNTP
د DNTPs غلظت خورا لوړ دی - د DNTP غلظت په مناسب ډول کم کړئ
A-5 دحرارت درجه
ooد ټیټ انیلینګ تودوخه —— په مناسب ډول د انیلینګ تودوخه لوړه کړئ
A-6 دورې
- ډیری دورې - د دورې شمیره غوره کړئ
لومړی ګام د مناسب پولیمریز غوره کول دي. منظم د تاک پولیمریز د 3'-5 'ایکسونوکلیز فعالیت نشتوالي له امله ثبوت نشي لوستلی ، او ناسم میتود به د ټوټو غزولو موثریت خورا راکم کړي. له همدې امله ، د تق تق پولیمریز نشي کولی په مؤثره توګه د 5 kb څخه لوی هدف ټوټې پراخه کړي. د ځانګړي ترمیم یا نورو لوړ وفادارۍ پولیمریز سره د تق پولیمریز باید د توسعې موثریت ښه کولو او د اوږدې ټوټې امپلیفیکیشن اړتیاو پوره کولو لپاره وټاکل شي. سربیره پردې ، د اوږدو ټوټو پراخول هم د پریمر ډیزاین ورته تنظیم کولو ته اړتیا لري ، د توزیع وخت ، د توسیع وخت ، د بفر pH ، او نور معمولا ، د 18-24 bp سره پریمر کولی شي غوره حاصل لامل شي. د ټیمپلیټ زیانونو مخنیوي لپاره ، په 94 ° C کې د تخفیف وخت باید په یوه دوره کې 30 ثانیو یا لږ ته راکم شي ، او د تودوخې درجه 94 ° C ته لوړیدو دمخه باید د 1 دقیقې څخه کم وي. سربیره پردې ، د تودوخې تودوخې شاوخوا 68 ° C کې تنظیم کول او د 1 kb/min نرخ سره د توسعې وخت ډیزاین کول کولی شي د اوږدو ټوټو مؤثره وده یقیني کړي.
د PCR پراخېدو د غلطۍ کچه د لوړ وفادارۍ سره د مختلف DNA پولیمیراسونو په کارولو سره کم کیدی شي. تر دې دمه د موندل شوي ټولو تاک DNA پولیمیرسونو کې ، Pfu انزیم د خطا ټیټه کچه او ترټولو لوړ وفاداري لري (ضمیمه شوی جدول وګورئ). د انزیم انتخاب سربیره ، څیړونکي کولی شي د عکس العمل شرایطو مطلوب کولو سره د PCR تغیر کچه نوره هم راکمه کړي ، پشمول د بفر ترکیب مطلوب کول ، د ترموستایبل پولیمریز غلظت او د PCR دورې شمیره مطلوب کول.
د محصولاتو کټګورۍ
ولې موږ غوره کوو
د دې له تاسیس راهیسې ، زموږ فابریکه د اصولو په مراعتولو سره د نړۍ لومړۍ درجې محصولاتو ته وده ورکوي
لومړی کیفیت. زموږ محصولاتو په صنعت کې عالي شهرت ترلاسه کړی او د نوي او زړو پیرودونکو ترمینځ ارزښت لرونکي اعتماد.
- تلیفون: +86 010-59822688
- ودانۍ 5 ، شمیره 86 ، شوانګینګ لویدیځ سړک ، د چینګپینګ ولسوالۍ ، بیجینګ.
- people@tiangen.com
