د PCR مل کټ

خورا لوړ فعالیت او لوړ ځانګړتیا د تق DNA پولیمریز.

ملټي PCR کټ یو محصول دی چې په ځانګړي ډول د ملټي پلیکس PCR لپاره رامینځته شوی. ملټي هټ سټارټ DNA پولیمریز په کټ کې شامل کیمیاوي تعدیل شوی او تر دې دمه موندل شوی غوره هټ سټارټ پولیمیراس دی. اختراع د PCR پریمر څو جوړو ته وړتیا ورکوي چې په ورته عکس العمل سیسټم کې ښه وده وکړي او ملټي پلیکس PCR عکس العملونه په حساس ډول ترسره کیدی شي.

بلی. نه	د بسته کولو اندازه
4992787	5 U × 50 rxn
4992788	5 U × 50 rxn

موږ ته بریښنالیک واستوئ

د محصول تفصیل

تجرباتي مثالونه

پرله پسې پوښتنې

د محصول ټګونه

برخی

■ لوړ مشخصات: د کیمیاوي تعدیل شوي ګرم پیل انزیم د فعالیت وخت سره تر 15 دقیقو پورې ترڅو د لوړ مشخصیت لوړولو ډاډ ترلاسه کړي.
sensitivity لوړ حساسیت: د ملټي پلیکس PCR ټیټ کاپي امپلیفیکیشن او لوړ موثریت لوړول.
■ ساده عملیات: انزایم په ټیټ تودوخې او د خونې تودوخې کې غیر فعال وي ، او ریګینټ د خونې په حرارت درجه کې چمتو کیدی شي.

د فعالیت تعریف

1 واحد (U) د هوټ سټارټ ټیک DNA پولیمریز فعالیت د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی چې د 10 nmol deoxynucleotides اسید-نه حل کېدونکي موادو کې د 30 دقیقو دننه په 30 دقیقو کې د فعال سالمون سپرم DNA په کارولو سره د ټیمپلیټ/پریمر په توګه تعریف شوی.

اصلي تخنیکي پیرامیټرې

دا د 5′-3 ′ exonuclease فعالیت لري او د 3′-5 ′ exonuclease فعالیت د قوي مشخصیت سره نلري. د PCR محصول 3 ′ پای A دی ، کوم چې په مستقیم ډول د TA کلونینګ لپاره کارول کیدی شي.

مشخصات

ډول: کیمیاوي تعدیل شوي هټ سټارټ DNA پولیمریز
غوښتنلیکونه: د ملټي پلیکس PCR تجربه ، د لوړ مشخصاتو کشف تجربه ، د ټیټ کاپي جین پراخه کول ، د پیچلي جوړښتونو سره د ټیمپلیټونو PCR پراخول (لکه جینومیک DNA ، cDNA ، او نور).

ټول محصولات د ODM/OEM لپاره تنظیم کیدی شي. د جزیاتو لپاره ،مهرباني وکړئ کلیک شوی خدمت (ODM/OEM) کلیک وکړئ

مخکینی: د فاسټ کینګ یو ګام RT-PCR کټ

بل: 2 × طاق PCR مکس

د انسان جینوم د 7 مختلف ټوټو پراخولو لپاره د نمونې په توګه وکاروئ (100 bp-1000 bp)
یادونه:
په ملټي پلیکس PCR کې د مختلف اوږدوالي پراخولو لپاره د تمدید وخت ټاکل: د 500 bp څخه کم ټوټو لپاره ، د 60 ثانیو لپاره غځول؛ د 500-1500 bp ټوټو لپاره ، د 90 ثانیو لپاره وغځوئ د 2000 bp څخه ډیر ټوټو لپاره ، د 120 ثانیو لپاره وغځوئ.
hot ګرم پیل د 15 دقیقو لپاره 95 ° C کې تودوخې ته اړتیا لري ترڅو د انزایم فعالیت کافي خوشې کیدو ډاډ ترلاسه کړي.

پوښتنه: د پراخولو بندونه نشته

A-1 کينډۍ

■ نمونه د پروټین ناپاکۍ یا د تقطیر مخنیوي ، او نور لري. DNA د DNA نمونه پاک کړئ ، د پروټین ناپاکۍ لرې کړئ یا د پاکولو کټونو سره د DNA نمونه راوباسئ.

template د سانچې ډیناتوریشن بشپړ ندی —— په مناسب ډول د ډیناتوریشن تودوخه لوړه کړئ او د ډیینټریشن وخت اوږد کړئ.

■ د کينډۍ تخريب the کينډۍ بيا چمتو کړئ.

A-2 پریمر

د پریمر ضعیف کیفیت-د پریمر بیا ترکیب.

■ د پریمر تخریب —— د لوړ غلظت لرونکي پریمر د ساتنې لپاره کوچني حجم ته جلا کړئ. د ډیری یخیدو او ژړیدو یا اوږدمهاله 4 ° C کریوپریزر څخه مخنیوی وکړئ.

pri د پریمرونو ناسم ډیزاین (د مثال په توګه د پریمر اوږدوالی کافي ندي ، د پریمرونو ترمینځ رامینځته شوی ډیمر ، او نور) -د ډیزاین پریمرونه (د پریمر ډیمر او ثانوي جوړښت رامینځته کیدو څخه مخنیوی وکړئ)

A-3 Mg²⁺تمرکز

■ Mg²⁺ تمرکز خورا ټیټ دی - په مناسب ډول Mg ته وده ورکول²⁺تمرکز: Mg غوره کړئ²⁺ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز²⁺ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.

A-4 دحرارت درجه

an د لوړ انیلینګ تودوخه د پریمر او ټیمپلیټ پابندۍ اغیزه کوي. د انیلینګ تودوخې کم کړئ او د 2 ° C درجې سره حالت مطلوب کړئ.

A-5 د تمدید وخت

extension د تمدید لنډ وخت extension د تمدید وخت زیات کړئ.

پوښتنه: غلط مثبت

فینومینا: منفي نمونې د هدف ترتیب بډونه هم ښیې.

د PCR A-1 ککړتیا

target د هدف ترتیب یا پراخولو محصولاتو کراس ککړتیا are په احتیاط سره په منفي نمونه کې د هدف ترتیب لرونکي نمونه پایپټ نه کړئ یا د سنټرفیج ټیوب څخه یې وغورځوئ. ریجنټونه یا تجهیزات باید د موجود نیوکلیک اسیدونو له مینځه وړو لپاره اتوماتیک شي ، او د ککړتیا شتون باید د منفي کنټرول تجربو له لارې وټاکل شي.

■ د ریجینټ ککړتیا the د ریجینټونو جلا کول او په ټیټ تودوخې کې ذخیره کول.

A-2 اعظمr

■ Mg²⁺ تمرکز خورا ټیټ دی - په مناسب ډول Mg ته وده ورکول²⁺ تمرکز: Mg غوره کړئ²⁺ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز²⁺ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.

■ د پریمر نامناسب ډیزاین ، او د هدف ترتیب د غیر هدف شوي ترتیب سره هومولوژي لري. د بیا ډیزاین پریمرونه.

پوښتنه: غیر مشخص توسعه

فینومینا: د PCR امپلیفیکیشن بینډونه د متوقع اندازې سره متناقض دي ، یا لوی یا کوچني ، یا ځینې وختونه دواړه ځانګړي امپلیفیکیشن بینډونه او غیر ځانګړي امپلیفیکیشن بینډونه واقع کیږي.

A-1 پریمر

pri د پریمر ضعیف مشخصات

د بیا ډیزاین پریمر.

■ د پریمر غلظت خورا لوړ دی ro په مناسب ډول د ډیناتوریشن تودوخه ډیروي او د ډیینټریشن وخت اوږدوي.

A-2 Mg²⁺ تمرکز

Mg د Mg²⁺ تمرکز خورا لوړ دی - په مناسب ډول د Mg2+ غلظت کم کړئ: Mg غوره کړئ²⁺ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز²⁺ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.

A-3 د تودوخې وړ پولیمریز

en د انزایم ډیر مقدار - د انزیم مقدار په مناسب ډول د 0.5 U په وقفو کې کم کړئ.

A-4 دحرارت درجه

■ د انیلینګ تودوخه خورا ټیټه ده —— په مناسب ډول د انیلینګ تودوخه لوړه کړئ یا د دوه مرحلو انیلینګ میتود غوره کړئ

د A-5 PCR دورې

د PCR ډیری دورې - د PCR دورو شمیر کم کړئ.

پوښتنه: پیچ یا سمیر بډونه

A-1 پریمرoor ضعیف مشخصیت-د پریمر بیا ډیزاین کول ، د پریمر موقعیت او اوږدوالی بدل کړئ ترڅو د دې مشخصیت لوړ کړي یا ځړول شوی PCR ترسره کړئ.

A-2 کينډۍ DNA

- دا سانچه خالص نده - سانچه پاک کړئ یا د پاکولو کټونو سره DNA راوباسئ.

A-3 Mg²⁺ تمرکز

—— ایم جی²⁺ تمرکز خورا لوړ دی - په مناسب ډول Mg کم کړئ²⁺ تمرکز: Mg غوره کړئ²⁺ د اعظمي Mg ټاکلو لپاره د 0.5 ملي میتر وقفې سره له 1 ملي میتر څخه تر 3 ملي میتر پورې د عکس العملونو لړۍ لخوا تمرکز²⁺ د هر ټیمپلیټ او پریمر لپاره تمرکز.

A-4 dNTP

د DNTPs غلظت خورا لوړ دی - د DNTP غلظت په مناسب ډول کم کړئ

A-5 دحرارت درجه

ooد ټیټ انیلینګ تودوخه —— په مناسب ډول د انیلینګ تودوخه لوړه کړئ

A-6 دورې

- ډیری دورې - د دورې شمیره غوره کړئ

پوښتنه: د 50 PCl PCR غبرګون سیسټم کې څومره نمونه DNA باید اضافه شي؟

پوښتنه: اوږده ټوټې څنګه پراخه کړو؟

لومړی ګام د مناسب پولیمریز غوره کول دي. منظم د تاک پولیمریز د 3'-5 'ایکسونوکلیز فعالیت نشتوالي له امله ثبوت نشي لوستلی ، او ناسم میتود به د ټوټو غزولو موثریت خورا راکم کړي. له همدې امله ، د تق تق پولیمریز نشي کولی په مؤثره توګه د 5 kb څخه لوی هدف ټوټې پراخه کړي. د ځانګړي ترمیم یا نورو لوړ وفادارۍ پولیمریز سره د تق پولیمریز باید د توسعې موثریت ښه کولو او د اوږدې ټوټې امپلیفیکیشن اړتیاو پوره کولو لپاره وټاکل شي. سربیره پردې ، د اوږدو ټوټو پراخول هم د پریمر ډیزاین ورته تنظیم کولو ته اړتیا لري ، د توزیع وخت ، د توسیع وخت ، د بفر pH ، او نور معمولا ، د 18-24 bp سره پریمر کولی شي غوره حاصل لامل شي. د ټیمپلیټ زیانونو مخنیوي لپاره ، په 94 ° C کې د تخفیف وخت باید په یوه دوره کې 30 ثانیو یا لږ ته راکم شي ، او د تودوخې درجه 94 ° C ته لوړیدو دمخه باید د 1 دقیقې څخه کم وي. سربیره پردې ، د تودوخې تودوخې شاوخوا 68 ° C کې تنظیم کول او د 1 kb/min نرخ سره د توسعې وخت ډیزاین کول کولی شي د اوږدو ټوټو مؤثره وده یقیني کړي.

پوښتنه: څنګه د PCR پراخولو وفادارۍ ته وده ورکړو؟

د PCR پراخېدو د غلطۍ کچه د لوړ وفادارۍ سره د مختلف DNA پولیمیراسونو په کارولو سره کم کیدی شي. تر دې دمه د موندل شوي ټولو تاک DNA پولیمیرسونو کې ، Pfu انزیم د خطا ټیټه کچه او ترټولو لوړ وفاداري لري (ضمیمه شوی جدول وګورئ). د انزیم انتخاب سربیره ، څیړونکي کولی شي د عکس العمل شرایطو مطلوب کولو سره د PCR تغیر کچه نوره هم راکمه کړي ، پشمول د بفر ترکیب مطلوب کول ، د ترموستایبل پولیمریز غلظت او د PCR دورې شمیره مطلوب کول.

خپل پیغام دلته ولیکئ او موږ ته یې واستوئ